Микробиологический словарь

Агар (агар-агар) - продукт, получаемый из морских водорослей и используемый как уплотнитель сред в микробиол. и пищевой промышленности. Представляет собой желтовато-белый порошок или пластинки. Содержит около 1,5 - 4% минеральных солей, 10 - 20% воды и 70 - 80% полисахаридов, в составе к-рых выявлены D- и L-галактозы, 3,6-ангидро-галактозы, пентозы, D-глюкуроновая и пировиноградная к-ты. Из А. экстрагирована агароза (см.). А. не расщепляется большинством микроорганизмов и не изменяет питательную ценность сред. Неочищенный А. может привести к образованию неполноценного геля и даже к ингибиции роста микробов. Поэтому для иммунол. и бактериол. целей надо использовать вымороженный осветленный А. высшего и первого сорта с плотностью геля не ниже 320 г/см3. Агаровый гель формируется в процессе кипячения или автоклавирования смеси порошка с водой при 115 -120°С в течение 15 мин с последующим охлаждением до 45 -48°С. Для получения плотных питательных сред А. добавляют в конечной концентрации от 1,5 до 3%, полужидких - 0,3 - 0,7% (масса/объём). Кроме того, агаровый гель применяют для иммуноэлектрофореза (см.) и иммунодиффузии.

Агар-микроскопия - м-д микроскоп, исследование морфологии колоний бактерий в процессе их роста на плотных питательных средах. В первом варианте приготовления препарата стерильное тонкое предметное стекло покрывают тонким слоем прозрачного МПА, содержащего небольшое число иссл. бактерий. Спустя несколько часов инкубации во влажной камере в термостате препарат рассматривают под большим сухим объективом светового или лучше фазово-контрастного микроскопа. Второй вариант приготовления препарата заключается в выращивании иссл. бактерий на тонком слое МПА в чашках Петри. После нескольких часов инкубации из среды вырезают блок размером в 1 см2 и микроскопируют, как в первом случае. М-д позволяет определить строение юных колоний, нативную морфологию бактерий и ее изменение в процессе роста, тип расхождения бактерий после простого деления.

Агароза - получаемый из агара линейный полисахарид, образованный из чередующихся остатков p-D-галактопиранозы и 3,6-ангидро- а-1-галактопиранозы, объединенных 1®4 связью. Обладает ярко выраженным св-вом к формированию гелей. Точка плавления - 95°С, точка образования геля - 45°. Для иммуноэлектрофореза и иммунодиффузии используют 2% гель в веронал-ацетатном буфере.

Агглютинабельность - свойство микроорганизмов и др. клеток склеиваться иммунными с-ками, содержащими гомологичные Ат. Степень А. зависит от авидности с-к, концентрации и соотношения Ат и Аг. См. Инагглютинабельность.

Агглютинации-лизиса реакция - см. Лептоспирозы.

Агглютинации реакция (РА) - способ выявления и количественного определения Аг и Ат, основанный на их способности к образованию видимых невооруженным глазом агломератов. В д-ке инфекц. болезней или в др. целях применяется для идентификации неизвестных микробов и клеток, для определения присутствия и количества Ат в с-ке крови и др. жидкостях. Принцип определения основан на специфичности взаимодействия Аг и Ат и состоит в нахождении известного по неизвестному. Существует много вариантов РА: количественные и качественные, пробирочные и на стекле, объемные и капельные, обычные, ускоренные и экспресс-м-ды. Для постановки РА необходимы:
1) сыворотка крови. В варианте с определением вида (вара) бактерий используют производственные агглютинирующие с-ки, изготовляемые путем иммунизации кроликов. В варианте с определением вида Ат берут с-ку крови, получаемую от иссл. людей или животных. С-ка должна быть стерильной и не содержать взвешенных частиц. Готовят основное разведение на физ-растворе. Оно должно быть в 2 -4 раза ниже диагностического титра при данном заболевании;
2) Аг. В варианте реакции с определением типа Ат используют производственные диагностикумы; в варианте с определением Аг диагностикумы готовят сами в виде 1 - 3-миллиардной взвеси на физрастворе 18 - 20-часовой агаровой (реже бульонной) к-ры иссл. микроба, инактивированной прогреванием на водяной бане при 70°С в течение 1 ч или 24-часовой инкубацией при 37°С с формалином (конечная концентрация 0,2%);
3) электролит в виде физраствора. Техника постановки объемной серийной пробирочной РА для определения титра Ат в с-ке: из основного разведения с-ки готовят несколько рядов рабочих разведении. Число рядов зависит от количества взятых в опыт диагностикумов, число и факторы разведения определяются диагностическим титром предполагаемого заболевания. В ряду по меньшей мере должны быть разведение, соответствующее диагностическому титру Ат, два разведения ниже и два разведения выше его. Например, если диагностический титр равен 1:100, то при объемном способе постановки РА должны быть приготовлены следующие разведения с-ки: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400; при капельном м-де первое разведение (1:25) не нужно, зато необходимо еще одно более высокое разведение - 1:800. В научных исследованиях с-ку титруют до отрицательной реакции. Разводят ее следующим образом: во все опытные пробирки, кроме 1-й, наливают по 0,25 мл физраствора при постановке реакции в объеме 0,5 мл и по 0,5 мл при постановке реакции в объеме 1 мл. В 1-ю и 2-ю пробирки вливают по 0,25 (0,5) мл основного разведения с-ки, из 2-й пробирки, в к-рой объем и разведение с-ки увеличились в 2 раза, 0,25 (0,5) мл переносят в 3-ю, из 3-й в 4-ю и т.д. до последней, из к-рой 0,25 (0,5) мл для уравновешивания объемов выливают во все. Каждое разведение с-ки осуществляют с помощью отдельной пипетки. Если в опыт берут несколько диагностикумов, то для каждого из них готовят таким же способом свой ряд разведении. В каждое разведение с-ки доливают диагностикум в объеме, равном объему с-ки, в результате чего разведение в каждой пробирке увеличивается в 2 раза. Опыту соответствуют контроль с-ки ( 0,25 -0,5 мл основного разведения с-ки и столько же физраствора) и контроль Аг ( 0,25 - 0,5 мл диагностикума и столько же физраствора). Если в опыт берут несколько диагностикумов, то каждому соответствует свой контроль Аг. Штатив с пробирками хорошо встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 4 ч, а затем оставляют при комнатной температуре до следующего дня, после чего проводят учет РА, основываясь на количестве осадка и степени просветления жидкости. Определение этих показателей в зависимости от характера агглютинатов осуществляют невооруженным глазом на темном фоне, в агглютиноскопе или над вогнутой поверхностью зеркала от микроскопа. Учет начинают с контролей: контроль с-ки должен быть прозрачным, Аг - равномерно мутным (после встряхивания пробирки). Если контроли хорошие, устанавливают наличие и степень агглютинации во всех опытных пробирках, к-рую обозначают плюсами: большой осадок и полное просветление жидкости - 4 плюса; большой осадок и неполное просветление жидкости - 3 плюса; заметный осадок и заметное просветление жидкости - 2 плюса. После этого определяют титр: наибольшее разведение с агглютинацией интенсивностью не менее 2 плюсов. Титр иссл. с-ки сравнивают с диагностическим титром для этого заболевания. Если титр иссл. с-ки в 2 раза ниже диагностического, реакцию оценивают как сомнительную; если титр равен диагностическому - как слабоположительную; если в 2 -4 раза выше его - как положительную, если в 8 и более раз выше - как резко положительную. При широком распространении Ат у здоровых людей для оценки РА применяют нарастание титра Ат. Для определения вида Аг в серийной РА число рядов должно соответствовать числу взятых для идентификации диагностических с-к. Из основного разведения диагностической с-ки готовят ряд последовательных двукратных разведении таким же способом, как и в РА для определения титра Ат. Факторы разведении зависят от титра агглютинирующей с-ки В опыте необходимо присутствие разведения, равного титру с-ки, а также в 2, 4, 6, 8 раз ниже его Напр., если титр диагностической с-ки равен 1 3200, то следует использовать разведения 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 К разведениям с-ки доливают такой же объем иссл Аг, в результате разведение с-к увеличивается в 2 раза К опыту ставят 2 контроля с-ки и Аг Если в опыте участвует несколько с-к, то к каждой из них нужен свой контроль По завершении реакции штатив энергично встряхивают и помещают в термостат при 37°С Результаты учитывают, как описано выше Оценка реакции имеет особенности Для того чтобы сделать вывод о соответствии иссл. Аг взятой в опыт с-ке, титр реакции должен соответствовать не менее половине титра стандартной диагностической с-ки Титры в 1 4 и ниже рассматривают как групповую реакцию Капельный м д постановки РА отличается от объемного тем, что с-ку разводят в объеме 1 мл, Аг применяют в более высокой концентрации (10 млрд/мл) и добавляют его по 1 - 2 капли в пробирку Разведение с-ки после внесения Аг считают неизмененным В остальном методика постановки, учета и оценки аналогична объемному м-ду

Агглютинации реакция на стекле - экспресс-методика постановки РА, в к-рой иммунную с-ку и корпускулярный Аг смешивают на поверхности чистого предметного или специального (с кольцами) стекла В связи с тем что оба ингредиента берут в концентрированном виде и взаимодействие их происходит при циркулярном покачивании, а иногда и при легком подогревании, реакция наступает быстро, через несколько минут или даже секунд, что выгодно отличает ее от реакции в пробирках Отрицательная черта этой методики - более низкая чувствительность При использовании неадсорбированных с-к, она недостаточно специфична и результат ее должен быть подтвержден РА в пробирках. Техника реакции состоит в том, что на поверхность стекла мерно (микропипеткой) или немерно наносят капли цельной или слегка разведенной с-ки и к ним добавляют каплю концентрированного корпускулярного Аг (взвесь бактерий, эритроцитов, латекса и др частиц с адсорбированным на их поверхности растворимым Аг). Капли смешивают петлей, стеклянной палочкой или циркулярным покачиванием стекла В качестве Аг можно использовать живую к-ру из плотной питательной среды (из колонии или сплошного роста) Тогда ее предварительно суспендируют на этом же стекле в капле физраствора, а затем соединяют с каплей с-ки В положительных случаях через несколько минут после соединения жидкость в капле становится прозрачной и по краям капли появляются хлопья или зерна Для более легкой регистрации стандартные диагностикумы иногда подкрашивают, напр. генцианвиолетом В сомнительных случаях к смеси добавляют каплю физраствора Реакция должна сопровождаться контрольными пробами капля бактер суспензии и капля физраствора, капля иссл с-ки и капля физраствора

Агглютинации торможения реакция - торможение агглютинации Аг гомологичными Ат в результате предварительного контакта Ат с иссл Аг, обычно гаптенной природы Основана на конкуренции Аг за паратоп Ат Высокочувствительна

Агглютинация - процесс склеивания антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами гомологичных Ат в присутствии электролита, заканчивающийся образованием видимого невооруженным глазом агглютината Агглютинат формируется в зависимости от условий постановки в сроки от нескольких секунд до суток Внешнее проявление А различно жгутиковые бактерии дают крупнохлопчатый осадок, капсульные - пленчатый или тяжистый, бескапсульные и безжгутиковые - мелкозернистый Различают прямую А , при которой Аг - это естественные структуры поверхности бактерий, эритроцитов и др , и непрямую (пассивную) А , когда растворимые молекулы Аг адсорбируют на инертном носителе (эритроцитах, частицах латекса, по-лиакриламида и др )

Агглютинины - антитела, обладающие свойством склеивать корпускулярные Аг (бактерии, эритроциты и др ) и вызывать их агглютинацию Относятся к иммуноглобули-нам классов G и М.

Агтлютиногены - корпускулярные анти гены (см ), дающие со специфической с-кой РА

Агрессины - поверхностные вещества микроорганизмов, интерферирующие с защитными факторами организма хозяина и тем самым резко усиливающие вирулентность микроба Имеют полисахаридную или белковую природу, хорошо растворяются в жидкостях организма, легко отделяются от бактер клетки и способны к диффузии по организму Вырабатываются в организмах восприимчивых хозяев и на специальных средах Обнаруживаются в фильтратах к-р Не токсичны Подавляют миграцию фагоцитов в очаг воспаления, снижают эффективность захвата и переваривания микробов фагоцитами, обладают антикомплементарным действием См К антигены